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產(chǎn)品簡介

本產(chǎn)品結(jié)合了飽和染料EvaGreen和抗體酶的優(yōu)點，是一款適用于高分辨率熔解曲線（High Resolution Melting，HRM）分析的專業(yè)試劑盒。本品是一種2× PreMix，PCR反應液配制十分簡單方便；具有分辨率高和模板高度適應性等特點。

與SYBR Green不同，EvaGreen在高濃度情況下不會抑制PCR反應；可以使雙鏈PCR產(chǎn)物的結(jié)合量達到飽和狀態(tài)，所以稱為“飽和染料”。不會產(chǎn)生SYBR Green 的“染料重排”現(xiàn)象，能夠很好的區(qū)分擴增產(chǎn)物之間單個堿基的差異。

本產(chǎn)品可用于已知SNP分析，以及未知突變基因掃描和甲基化PCR分析等研究。

試劑盒特點

1. HRM Analysis PreMix采用了抗體修飾的熱啟動DNA聚合酶，配合精心優(yōu)化Buffer體系，具有高擴增效率，高擴增特異性和寬廣的可信范圍的特點。

2. HRM Mix中預混有Eva Green飽和染料，其在飽和狀態(tài)下具很高的熔解曲線分辨率，可以區(qū)分單個堿基的變異。

3. 該產(chǎn)品獨特的Buffer體系進一步增加了熔解曲線的穩(wěn)定性，提高擴增的特異性。

4. 本產(chǎn)品附帶ROX Reference Dye，用于消除信號本底以及校正孔與孔之間產(chǎn)生的熒光信號誤差，方便客戶針對不同型號熒光定量PCR儀時選擇對應濃度使用。

儲存條件

收到本產(chǎn)品后， 請立即置于-20 ℃ 避光保存。從-20 ℃ 取出使用時， 將凍存的2x HRM Analysis PreMix和50×ROX Reference Dye溶解，然后輕輕顛倒混勻，待溶液完全均一后再行使用。如解凍后沒有使用，須徹底混勻后重新冷凍(在解凍過程中鹽會出現(xiàn)分層現(xiàn)象，未混勻進行冷凍，鹽晶體的析出將會對酶造成損害)。如需一段時間內(nèi)經(jīng)常取用，可在2～8℃條件下儲存3個月。避免反復多次凍融。

注意事項

1．本產(chǎn)品中含有熒光染料EvaGreen，保存本產(chǎn)品或配制PCR反應液時應避免強光照射。

2．如果試劑沒有混勻，其反應性能會有所下降。使用時請上下顛倒輕輕混勻，請不要使用振蕩器進行混勻，盡量避免出現(xiàn)泡沫，并經(jīng)瞬時離心后使用。

3．引物純度對反應特異性影響很大，建議使用PAGE級別以上純化的引物。

4．20 μl反應體系中，基因組DNA模板的使用量一般小于100 ng，并盡量保持不同反應之間有相同的模 量。模板純度，OD260/280 1.6~2.0，OD260/2301.5~2.0。

5．由于HRM具有很高的靈敏性，因此在條件允許的情況下推薦使用50 ul反應體系，大的反應體系可以提高反應重復性，減少實驗誤差對熔解曲線的負面影響。

6．引物設(shè)計：較短的PCR產(chǎn)物可以提高HRM的分辨率；因此在設(shè)計PCR引物時，遵循普遍的原則外，盡量保持產(chǎn)物長度在80~120之間。SNP位點盡量處在PCR產(chǎn)物序列中間位置。